Cenedese

Здоровье прежде всего!

Игх

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы: как расшифровать результат

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы – это изучение образцов тканей с помощью микроскопа. Сначала врач берет образец ткани в ходе биопсии. Затем его коллега изучает образец на стеклышке в лаборатории. Если у пациента есть подозрение на рак молочной железы, именно иммунологическое исследование подтвердит или опровергнет эту гипотезу. Этот сравнительно новый анализ считается одним из самых информативных при проведении дифференциальной диагностики на наличие тканей раковой опухоли.

Суть исследования

Иммуногистохимическое исследование также называют ИГХ. Метод основан на взаимодействии определенных антител с белковыми структурами и рецепторами раковых клеток. Если в молочной железе появилась опухоль, введенные в ткань антитела присоединяются к раковым клеткам и дают свечение определенной длины волны. Метод позволяет выявить точное расположение основной опухоли (очага) и метастазов (если таковые имеются).

Наличие или отсутствие карциномы молочной железы определяется по рецепторам двух гормонов: эстрогена и прогестерона. Также исследование определяет уровень рецепторов HER2.

HER2 – вещество, которое активирует рост белков на внешней мембране клеток эпидермиса. Если рецепторов HER2 в образце ткани больше нормы, это говорит о развитии карциномы. Суть метода сводится к тому, чтобы определить с помощью антител концентрацию рецепторов HER2, прогестерона, эстрогена и онкобелка Ki-67.

Иммуногистохимия рака молочной железы также проводится непрямым методом с помощью биотин-авидинового комплекса. Непрямой метод состоит из трех этапов:

  • В образец ткани, взятый при биопсии, вводятся первичные антитела. Если в ткани есть опухоль, эти антитела контактируют с антигенами раковых клеток.
  • Затем вводятся вторичные антитела, для которых антигенами являются первичные антитела. В итоге вторичные антитела соединяются с первичными.
  • Вводится комплекс, который состоит из трех субстанций: биотин, авидин и специальный фермент. Он находит вторичные антитела и соединяется с их биотином.

У непрямого метода ИГХ есть 3 преимущества:

  • Реакция происходит в течение всего трех часов.
  • Он увеличивает чувствительность определения антигенов.
  • На анализ нужно меньше антител.

Вне зависимости от методики исследование позволяет:

  • Определить тип новообразования.
  • Заметить злокачественную трансформацию раковых клеток.
  • Выявить очаг и метастазы.
  • Прогнозировать дальнейшее развитие опухоли.
  • Вовремя назначить лечение и спасти пациента.

Показания к исследованию

Этот анализ показан пациентам с подозрением на рак молочной железы или людям, которые испытывают неприятные ощущения или боль при прощупывании сосков. Иммуногистохимическое исследование помогает врачам выявить расположение опухоли. Однако если в организме появились метастазы, иммуногистохимия выявит и их.

Большое преимущество метода – отсутствие противопоказаний. Любой мужчина или женщина может сдать анализ, если переживает из-за неприятных ощущений или болей в груди. Если опухоль выявлена на раннем этапе (когда она состоит из доброкачественных клеток), пациенту не потребуется операция или вредная для иммунитета химиотерапия. В этом случае достаточно провести курс гормональной терапии. Положительный исход наступает в 75–80 % случаев.

Подготовка к исследованию

Обратите внимание, что никаких специальных требований к подготовке нет. Пациент может употреблять алкоголь и жирную пищу, курить или не соблюдать режим дня. Все это никак не скажется на точности результата исследования.

Как проводится анализ

Иммуногистохимия рака молочной железы по прямому методу проводится в 6 этапов:

  • Врач проводит трепанобиопсию молочной железы. Он берет небольшой кусочек ткани с места предполагаемой опухоли (где пациентка чувствует боль или дискомфорт).
  • Образец ткани направляют в лабораторию, где помещают в формалин. Это нужно для обезжиривания образца.
  • Затем ткань извлекают и окунают в жидкий парафин. Это первый этап в подготовке образца к исследованию под микроскопом.
  • Полученный блок из ткани молочной железы и застывшего парафина разрезают на тонкие кусочки толщиной до 1 мм.

Каждый полученный срез окрашивают антителами. Через определенное время лаборант исследует срез и делает заключение. Время реакции может занимать от 3 часов до 12 дней в зависимости от метода ИГХ.

Расшифровка результатов

В результате анализа указан показатель Ki-67 и статус HER2. Сначала проведем расшифровку показателя Ki-67.

Ki-67 – это белок, который используется как онкомаркер при карциноме молочной железы. Этот белок содержится в ядре клеток и в норме, но при онкозаболевании его концентрация резко возрастает. В первую очередь это касается пациентов с ER-положительным раком (повышенное содержание эстрогена в тканях молочной железы). Чем выше уровень Ki-67 в процентном отношении, тем хуже прогноз для пациента.

Расшифровка статуса HER2 более простая: он может быть положительным или отрицательным. Если статус положительный, это говорит о высоком содержании рецепторов HER2 в образце ткани. Это вызвано особым видом карциномы молочной железы, который развивается быстрее, а потому более опасный. Лечить такое заболевание нужно с помощью препаратов, действие которых направлено на белок HER2.

которые определяют ак

Также в результатах исследования могут указать статус ER и PR. Аббревиатура ER+ означает, что у пациента диагностирован рак с преобладанием рецепторов эстрогена. Точно так же маркировка PR+ говорит о раке с рецепторами прогестерона. Если после обеих аббревиатур стоит “–”, значит, в образце ткани нет карциномы молочной железы с рецепторами этих гормонов.

Итак, по итогам вышесказанного выделим две разновидности рака молочной железы:

  • С повышенной концентрацией рецепторов прогестерона или эстрогена (PR+ или ER+). Клетки этого подвида рака называют гормонально-положительными.
  • С преобладанием HER2 (HER2-положительный результат анализа).

У обоих подвидов уровень онкобелка Ki-67 в ядре или хромосомах клеток выше нормы. Рассмотрим, какое лечение назначают при тех или иных результатах ИГХ.

ER+ и PR+ рак лечат гормональной терапией. Лечение направлено на снижение соответствующего гормона в молочной железе. Такой вид заболевания лечится гораздо легче, при этом ремиссия наступает в 95 % случаев при уровне Ki-67 менее 10 %. Однако существует риск, что через несколько лет после лечения возникнет рецидив.

“Если результат анализа на HER2 составляет +3, это говорит о HER2-положительном статусе”, – сообщают лаборанты компании DILA. – Такой рак лечат препаратами, нацеленными на белок HER2. При результате +2 говорят о “двустороннем” статусе HER2 в опухоли. В этом случае нужно уточнить результат с помощью метода FISH. При показателях 0 или +1 анализ считается HER2-отрицательным”.

Есть случаи, когда результат анализа выявил HER2 +3, ER+ и PR+ одновременно. Это так называемая тройная-позитивная опухоль. В этом случае сначала назначают препарат, направленный на белок HER2. Затем в курс лечения добавляют препараты, снижающие уровень эстрогена и прогестерона.

Если результат анализа отрицателен для HER2, ER и PR, но уровень белка Ki-67 выше 10 %, диагностируют более опасный вид рака. Чаще всего он встречается у женщин из Африки и Латинской Америки. Опухоль развивается быстро и перерастает в злокачественную, поэтому здесь поможет только химиотерапия.

Прогностические факторы

По уровню Ki-67 можно сделать предварительный прогноз независимо от способа лечения пациента. Прогноз указан в таблице ниже.

Уровень содержания Ki-67, %

Прогноз выживаемости пациента, %

10–15

15–30

70–75

Существуют и другие, не менее важные прогностические факторы, о которых нужно знать пациенту с раком молочной железы:

  • Размер опухоли.
  • Степень злокачественности опухоли.
  • Наличие метастазов в лимфатических узлах.
  • Маркеры, которые определяют активность синтеза ДНК.
  • Уровень прогестерона и эстрогена.

Предсказывающие факторы

Факторы, которые помогут предсказать ответ на лечение рака молочной железы:

  • Интервал между лечением опухоли и возникновением метастазов.
  • Скорость увеличения размеров метастазов и временные промежутки между появлением новых метастазов.
  • Количество метастазов и их расположение.
  • Возраст и общее состояние больной.
  • Менструальный цикл пациентки.
  • Химиотерапия и лечение гормонами, которые предшествовали лечению (и ответ на них).

Обратите внимание! Чем выше уровень Ki-67, тем лучше карцинома реагирует на химиотерапию с комплексе с медикаментозным лечением. Это связано с тем, что комплекс из химии и медикаментов воздействует на раковые клетки, которые находятся в фазе активного роста. В ядре таких клеток концентрация белка Ki-67 увеличивается.

Теперь вы знаете, как проводится ИГХ, как расшифровать его результаты, какие прогнозы можно сделать в зависимости от тяжести заболевания и какие существуют предсказывающие факторы. Желаем вам быть здоровыми, чтобы надобность в иммуногистохимическом исследовании никогда не возникла!

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ)

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ). Что это?

Иммуногистохимия является дополнительным методом исследования, применяемым в патологической анатомии при диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований, когда постановка диагноза по гистологическим препаратам не представляется возможной или требуется уточнение клинически важных молекулярных параметров опухоли.

Данная методика основана на выявлении в анализируемом образце ткани белков, специфичных для того или иного вида клеток, что позволяет отличать один вид опухоли от другого, а также выявлять маркеры, отвечающие за лекарственную чувствительность опухолевой ткани.

Зачем нужна иммуногистохимия, если уже сделано гистологическое исследование?

В ряде случаев проведения обычного гистологического исследования биопсии бывает недостаточно, что объясняется следующими причинами:

  • опухоль имеет крайне неспецифичное микроскопическое строение, которое не позволяет поставить окончательный диагноз.

Например, диагноз практически всех лимфом и лейкозов (более 70 видов!) ставится после ИГХ исследования, а в части случаев дополнительно требуется молекулярно-генетическое исследование; в свою очередь, за гистологическим диагнозом «мелкокруглоклеточная опухоль» может скрываться до 13 различных злокачественных опухолей, каждая из которых имеет свой прогноз и требует индивидуального плана химиолучевого лечения – единственным методом, способным помочь врачу в дифференцировании этой группы опухолей, является ИГХ исследование.

Сроки выполнения ИГХ исследования

В соответствии с п.24 Приказа №179н от 24.03.2016 г. Минздрава России, срок выполнения ИГХ исследования:

  • с использованием до 5 маркеров включительно – не более 7 рабочих дней,
  • с использованием более 5 маркеров – не более 15 рабочих дней.

Возможности ИГХ исследования

1. Диагностика:

  • окончательное (реже промежуточное) установление диагноза опухолевого процесса (различные варианты рака, саркомы мягких тканей, меланома, типирование лимфом и лейкозов),
  • уточнение степени злокачественности опухоли (напр., нейроэндокринной опухоли), что будет определять прогноз заболевания,
  • дифференциальная диагностика опухолей и неопухолевых процессов,
  • определение органной принадлежности метастаза с неизвестной первичной локализацией (применимо не для всех опухолей!),
  • дифференцирование множественных опухолевых процессов (наличие у пациента 2 и более разных опухолей).

2. Лекарственная чувствительность

  • рецепторы стероидных гормонов (рецепторы эстрогенов, рецепторы прогестерона, рецепторы андрогенов) – рак молочной железы, рак тела матки (эндометрия), другие опухоли;
  • белок Her2/neu — рак молочной железы, рак желудка, рак мочевого пузыря;
  • рецепторы соматостатина 2А и 5 типов – нейроэндокринные опухоли (карциноиды);
  • PD-L1 – немелкоклеточный рак легкого, беспигментная меланома, другие опухоли;
  • ALK — немелкоклеточный рак легкого;
  • ROS1 — немелкоклеточный рак легкого;
  • микросателлитная нестабильность (MSI) – рак толстой кишки, другие опухоли;
  • индекс пролиферативной активности (Ki-67) – различные виды злокачественных опухолей.

Стоимость

Пациенты, не находящиеся на госпитализации в стационарах НМИЦ онкологии, могут узнать о стоимости ИГХ исследования в регистратуре патологоанатомического отделения (4 этаж, каб. №12).

Если у меня есть полис ОМС, должен ли я платить за иммуногистохимическое исследование?

Для всех пациентов, находящихся на госпитализации в стационарах НМИЦ онкологии и получающих медицинскую помощью по ОМС или ВМП (высокотехнологичная медицинская помощью), ИГХ исследование выполняется бесплатно. Необходимым условием выполнения бесплатного исследования является нахождение пациента на госпитализации в стационаре на момент оформления ИГХ.

Во всех остальных случаях ИГХ исследование выполняется засчет личных средств пациента.

За более подробной информацией рекомендуем обращаться в вашу страховую компанию.

Иммуногистохимические тесты

Опухоли молочной железы

Рак молочной железы является наиболее часто встречающимся видом рака у женщин и второй по частоте причиной смерти, связанной с раком. Ранняя диагностика, своевременно и правильно проведенное лечение могут значительно повысить шансы на выздоровление. Традиционные техники иммуногистохимии (ИГХ) позволяют работать с очень небольшими образцами ткани. Это обстоятельство в сочетании с применением антител, специфичных по отношению к антигенам опухолевых клеток, делает данный метод эффективным средством в руках патоморфолога, занимающегося диагностикой и прогнозированием течения онкологических заболеваний.

Основные диагностические маркеры:

  • Estrogen Receptor
  • Progesterone Receptor
  • HER-2/neu
  • Ki-67
  • p120 Catenin
  • CadherinE
  • «Золотой стандарт» диагностики опухолей молочной железы — гормональный профиль PR, ER, HER-2/neu, Ki-67 — это диагностика всех доступных рецепторов, которые отвечают за активность раковой ткани. Включает в себя исследование нескольких показателей.
  • PR, ER — это специфические белки-рецепторы, которые реагируют на выработку эстрогенов и прогестерона. Большинство раковых образований молочной железы (около 80 процентов) активно реагируют на изменения фона гормонов. Определение реактивности этих рецепторов играет важнейшую роль при оценке возможностей терапии гормонами.
  • HER-2/neu — это генная белковая структура, которая расположена в раковой ткани. Представляет собой рецептор, который реагирует на выработку специфических антител. Исследовать данный параметр целесообразно с точки зрения определения прогноза лечения рака. При высокой активности HER-2/neu опухоль плохо поддается лечению, требуется сначала моноклональная терапия, направленная на подавление активности этой структуры.
  • Ki-67 — это белковая структура, обладающая способностью активизироваться при активном росте опухоли. Исследование этого показателя дает возможность оценить прогноз для жизни больного. Чем выше экспрессивные характеристики Ki-67, тем меньше опухолевая дифференцировка, тем меньше шансов у больной женщины на выздоровление.

Опухоли предстательной железы

Рак предстательной железы – одно из самых распространенных онкологических заболеваний в мире. Большинство случаев (50 – 70%) диагностируется на 3-4 стадиях, в том числе 25% — с генерализацией опухолевого процесса. К сожалению, ранняя диагностика рака затруднена из-за частого отсутствия характерных симптомов. Наряду с клиническими методами, наиболее информативным является метод гистологического исследования биоптатов предстательной железы.

Основные диагностические маркеры:

Опухоли легкого

Рак легкого является одной из наиболее частых причин смерти. В мире ежегодно от данного заболевания умирает около 1 миллиона человек. У мужчин рак легкого в 85-90% случаев связан табакокурением. Прогноз при раке легкого остается неблагоприятным. При отсутствии лечения с момента установления диагноза в течение 2 лет погибает до 90 % больных. При хирургическом лечении 5-летняя выживаемость составляет около 30%. Хирургическое лечение в сочетании с лучевой и медикаментозной терапией увеличивает 5-летнюю выживаемость на 40 %. Наличие метастазов значительно ухудшает прогноз. Современная диагностика и лечение больных раком легкого не может обходиться без морфологической верификации опухоли с уточнением гистологической структуры и степени анаплазии (дифференцировки) опухолевых клеток. Иммуногистохимический метод остается одним из самых информативных методов на данном этапе диагностики

Основные диагностические маркеры:

  • Thyroid Transcription Factor-1;
  • Cytokeratin 7;
  • НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНЫЙ РАК ЛЕГКОГО
    • ALK (DE5F3);
  • ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫЙ РАК ЛЕГКОГО
    • Cytokeratin 14;
    • Cytokeratin 5/6;
    • CEA;
    • EGFR;
  • МЕЛКОКЛЕТОЧНАЯ КАРЦИНОМА ЛЕГКОГО
    • ChromograninA;
    • Synaptophysin;
  • АДЕНОКАРЦИНОМА ЛЕГКОГО
    • EMA;
    • CytokeratinPan.

Меланома

Мелано́ма (лат. melanoma, melanoma malignum от др.-греч. μέλας — «черный») (уст. Меланобластома) — злокачественная опухоль, развивающаяся из меланоцитов — пигментных клеток, продуцирующих меланины. Одна из трёх разновидностей рака кожи, и самая опасная из них. Преимущественно локализуется в коже, реже — сетчатке глаза, слизистых оболочках (полость рта, влагалище, прямая кишка). Одна из наиболее опасных злокачественных опухолей человека, часто рецидивирующая и метастазирующая лимфогенным и гематогенным путем почти во все органы. Верификация меланомы кожи и ее метастазов остается одной из наиболее сложных задач для онкоморфолога. Среди беспигментных меланом встречаются узловые, поверхностно-распространяющиеся, типа лентиго, светлоклеточные, веретеноклеточные, плеоморфные, мелкоклеточные, миксоидые, «невоидные», перстевидноклеточные и другие формы.

Основные диагностические маркеры:

Стандартная панель содержит около пяти иммуногистохимических маркеров:

  • р53 — степень активности митоза меланомы;
  • Ki-67 — оценка интенсивности пролиферации, определяет прогноз болезни;
  • bcl-2 — белок, который препятствует естественному апоптозу меланомы кожи, оценивается вероятность метастазирования;
  • HMB-45 — оценка функции меланоцитов;
  • S-100 — типичный антиген, встречающийся только при меланоме, позволяющий отличить от других опухолей или доброкачественных образований.

Лимфопролиферативные заболевания

Лимфома – злокачественное опухолевое заболевание лимфатической системы. Среди лимфом выделяют лимфогранулематоз (лимфому Ходжкина) и все остальные виды лимфом — неходжкинские лимфомы (НХЛ). По тому, из каких именно видов лимфоидных клеток возникает опухоль, выделяют В-, Т- и (редко) NK-клеточные лимфомы. Большинство лимфом – В-клеточные. Диагностика лимфопролиферативных заболеваний в настоящее время занимает передовые позиции в современной патологии и требует одну из самых обширных панелей маркеров. Суммарная заболеваемость всеми видами неходжкинских лимфом в европейских странах составляет 12-15 случаев на 100 тысяч населения в год. Риск их возникновения увеличивается с возрастом. Инфицирование вирусом Эпштейна-Барр связано с повышенным риском заболевания различными видами лимфом, включая лимфому Беркитта. У детей неходжкинские лимфомы сравнительно редки: к детскому и подростковому возрасту относится не более 5% всех случаев НХЛ. Однако все же лимфомы занимают в структуре злокачественных заболеваний детского возраста третье место по частоте – после лейкозов и опухолей центральной нервной системы.

Основные диагностические маркеры:

Стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта (СОЖКТ)

СОЖКТ возникают преимущественно в желудке (60 %) и тонком кишечнике (25 %), но также наблюдаются в прямой кишке (5 %), пищеводе (5 %) и ряде других мест (5 %), в том числе аппендикс, желчный пузырь, мезентерий и сальнике. Возраст заболевших пациентов колеблется в диапазоне от подросткового возраста до 90-летних, но большинство больных старшего возраста с пиком около 60 лет. В большинстве исследований наблюдается незначительная предрасположенность мужчин. В 1998 было показано, что СОЖКТ экспрессирует тирозинкиназный рецептор KIT (CD117). Причиной возникновения этих опухолей оказались интерстициальные клетки Кахаля (ICC). Подобно СОЖКТ, клетки Кахаля экспрессируют KIT и большинство положительно на CD34. Последующие исследования с большим числом разных лабораторий подтвердили, что KIT – это единственный наиболее специфичный маркер СОЖКТ. Иммуноопределяемый KIT присутствует на клеточной поверхности и/или в цитоплазме опухолевых клеток СОЖКТ приблизительно в 90 % случаев. В подавляющем большинстве опухолей экспрессия KIT бывает сильной и однородной, но в некоторых случаях демонстрируется только фокальная положительная реактивность и KIT отсутствует в небольшой подгруппе (~5%) опухолей, которые по другим мофологическим и иммунофенотипическим признакам соответствуют СОЖКТ. Среди KIT-положительных СОЖТК экспрессия CD34 определяется в 60-70 % случаев, тогда как 30-40 % имеют положительную реакцию на гладкомышечный актин (SMA), а 5% — на белок S-100. Ни один из этих антигенов не является специфичным для СОЖКТ. Экспрессия десмина в истинных KIT-положительных СОЖКТ является крайне редкой (1-2 % случаев) и обычно фокальной. Данная форма онкологических заболеваний тяжело поддается морфологической диагностике. Используя современные панели маркеров возможно четко и обоснованно диагностировать разные формы описываемой патологии. Иммуногистохимическоее исследование является обязательным.

Основные диагностические маркеры:

  • CD117 c-kit;
  • CD34;
  • Desmin;
  • Beta-Catenin;
  • S100;
  • GFAP;
  • CD99;
  • ActinSmoothMuscle.

Колоректальный рак

Колоректальный рак является третьим по частоте диагностируемым раком в Соединенных Штатах (за исключением рака кожи) среди мужского и женского населения. Показатели заболеваемости колоректальным раком снижаются на протяжении последних двух десятилетий (с 66,3 случаев на 100000 человек в 1985 году до 45,5 случаев в 2006 году). Это связывают с увеличением использования колоректальных скрининг-тестов, которые позволяют обнаруживать и удалять полипы ЖКТ до их перерождения в рак. В отличие от общего сокращения, среди взрослого молодого населения в возрасте до 50 лет, для которого скрининг не рекомендуется из-за средней степени риска, заболеваемость раком ободочной и прямой кишки увеличивались с 1994 года примерно на 2% в год у мужчин и женщин. В 2016 году США смертность от колоректального рака составила 49500 случаев. Смертность от колоректального рака снизились в обоих группах мужчин и женщин за последние несколько десятилетий, с более крутым снижением в последний период времени. Это снижение отражает снижение показателей заболеваемости и улучшение ранней диагностики и лечения. Ранние стадии рака ободочной и прямой кишки обычно не имеют симптомов, поэтому, чтобы выявить заболевание на этой ранней стадии часто необходим скрининг. Прогрессирование болезни может вызвать кровотечение из прямой кишки, появление крови в кале, изменение в опорожнении кишечника, схваткообразные боли в нижней части живота. Применение ИГХ при раках толстого кишечника рассматривается на нескольких уровнях: для характеристики опухолей (эндокринный или эпителиальный тип), наследственной предрасположенности и для целей прогноза. Преобладающее использование ИГХ — это определение возможных или предполагаемых метастазов, в которых толстой кишки является возможным первичным. Типичной локализацией для метастазов толстой кишки являются печень и легкие, оба органа, которые могут производить морфологию рака идентичную метастазам из толстой кишки. ИГХ, (класс I правил регулирования FDA), используется после первичной диагностики опухоли путем гистопатологического исследования и не включается для клиницистов как независимое исследование.

Основные диагностические маркеры:

  • Beta-Catenin;
  • BRAF;
  • CDX-2;
  • COX-2;
  • Cytokeratin 7;
  • Cytokeratin 19;
  • Cytokeratin 20;
  • MLH1;
  • MLH2;
  • MLH6;
  • MSLN;
  • MUC1;
  • MUC2.

Метастатическая карцинома

Наиболее часто применение иммуногистохимии в изучении опухолей печени – это определение источника метастаза, когда первичная локализация опухоли не известна. Развитие и применение панели для иммунных окрашиваний может помочь решить почти все диагностические проблемы. 2-6 Цитокератины (CK) 7 и CK 20 – первая ступень в идентификации многих опухолей и с дополнительными иммунными реакциями относительно специфичными для опухолей женского и мужского полового тракта, нередко дает возможность идентифицировать первичную локализацию метастатической опухоли.

Основные диагностические маркеры:

  • Цитокератины различного молекулярного веса (CK 18, CK 19, CK 7, и CK 20 и др.).

Также в диагностическую панель рекомендуется включать ИГХ тесты, направленные на экспрессию НER2/neu и Ki-67.

  • НER2/neu — представляет собой мембранный белок, который кодируется геном ERBB2. Повышение его экспрессии имеет важное значение в патогенезе и прогрессировании определенных злокачественных процессов. Тестирование данного рецептора является важным биологическим маркером рака желудка, молочной железы, матки и ее придатков.;
  • Ki-67 — ядерный антиген, состоящий из двух полипептидных цепей и являющийся основной частью нуклеарного матрикса. Его экспрессия позволяет выделить пролиферирующие клетки опухолевидного образования, которые находятся в активной фазе жизненного цикла клетки. Данный маркер позволяет определить фенотип и скорость роста опухоли, риск ее метастазирования, потенциальную ответную реакцию на лечебные мероприятия и исход патологического процесса.

Опухоли желудка.

Иммуногистохимические исследования (ИГХ) , как правило, не требуются для оценки доброкачественных и злокачественных эпителиальных опухолей желудка, так как гистопатология, как правило, обеспечивает диагностику, но ИГХ нужна при изучении метастатического рака желудка, когда источник происхождения опухоли не ясен, или когда макроскопические / рентгенологическое проявления опухоли сбивают с толку (например, рак желудка напрямую и широко прорастает в печень и гистологически неотличим от холангиокарциномой). К тому же, ИГХ может быть полезна для идентификации некоторых вариантов желудочных карцином, включая гепатоидную аденокарциному, в которой печеночная дифференцировка может быть подтверждена позитивной реакцией на альфа-фетопротеин AFP. Аденокарциномы желудка будут реагировать со многими антителами против кератинов, включая, CK 18, CK 19, CK 7, и CK 20. Когда CK 7 и CK 20 используются вместе, многие аденокарциномы желудка будут окрашиваться как CK 7 так и CK 20. Примерно 25% случаев будет иметь фенотип CK 7 + / CK 20-, или CK 7- / CK 20+), и небольшое число случаев будет отрицательным для обоих маркеров. Первоначально считалось, что CDX-2 — специфический маркер для рака толстой кишки, будет реактивными в более чем 50% случаев и может быть свидетельством меньшей степени инвазивности. Аденокарцинома желудка, как кишечного типа, так и типа перстневидноклеточной карциномы, могут иметь нейроэндокринную дифференцировку и что может быть не очевидно по гистологической картине, но проявляться по окрашиванию хромогранином и /или синаптофизином

Определение экспрессии рецептора EGFR при опухолях эпителиальной природы

Иммуногистохимическое (ИГХ) определение экспрессии рецептора EGFR при колоректальном раке и опухолях легкого, а также при опухолях шеи и головы, проводят для адекватного выбора схем химиотерапевтического лечения.

EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) является одним из трансмембранных рецепторов, экспрессируется на поверхности эпителиальных клеток и принимает участие в регуляции роста клеток и дифференцировки. Деление клеток в его присутствии происходит намного быстрее. При активации рецептора EGFR после связывания с факторами роста (EGF и TGF-a), запускаются механизмы, которые приводят к росту опухоли и пролиферация раковых клеток повышается, также стимулируется процесс метастазирования.Экспрессия EGFR — это показатель, свидетельствующий о том, что рост опухоли стимулируется деятельностью рецептора эпидермального фактора роста. Так как активация рецептора происходит за счет веществ самого новообразования, то правильнее будет говорить о экспрессии EGFR опухолью.Экспрессия EGFR обнаружена при следующих формах рака: легких, шеи и головы, толстой и прямой кишки. Иммуногистохимическое определение экспрессии EGFR позволяет установить статус этих рецепторов и назначить лечение. Экспрессия EGFR напрямую связана со степенью злокачественности и стадией развития опухоли.Специалист в соответствии с полученными данными иммуногистохимического исследования классифицирует опухоль как EGFR-отрицательную или EGFR-положительную.

Гиперэкспрессия EGFR говорит о высокой злокачественности, поздних сроках развития опухоли и метастатических процессах. Этот фактор является неблагоприятным в отношении прогноза болезни и свидетельствует о высокой пролиферативной активности опухоли, агрессивности, устойчивости к проводимой терапии.

Низкая степень экспрессии EGFR свидетельствует о регрессе опухоли положительной динамике в лечении.

Иммуногистохимическое исследование рецепторной чувствительности к эстрогенам и прогестерону в эндометрии

Иммуногистохимическое исследование рецепторной чувствительности к эстрогенам и прогестерону в эндометрии проводится для выявления причин отсутствия фертильности, а также для оценки злокачественности процессов в тканях матки. Исследование сложное, проводится планово, необходима соответствующая квалификация патологоанатома.

Рецепторы к эстрогенам (ER) и прогестерону (PR) — это чувствительные маркеры, которые реагируют на колебания некоторых гормонов, влияющих на рост опухолей и развитие гиперпластических процессов в эндометрии. Расположены они как в тканях эпителия матки, так и в клетках молочной железы. Их определение дает возможность оценить влияние гормональных факторов на прогрессию злокачественного роста, а кроме того, выявить наличие других очагов активности, помимо маточного. Входят в программу обязательного скрининга у больных женщин с подозрением на инфильтративную активность рака.

Иммуногистохимическое исследование проводят при:

  • бесплодии;
  • опухолях эндометрия;
  • дисфункции менструаций;
  • гиперпластических процессов в эндометрии.

При бесплодии методика позволит выяснить, может ли плодное яйцо прикрепится к стенке матки. Для рака метод не является способом ранней диагностики. Оценка рецепторной активности позволяет выявить наличие метастазирования, и оценить эффективность лечения в полости матки. При нарушениях овуляции методика выясняет эффективность гормональной терапии. При изменениях в полости матки гиперпластического характера усиление активности рецепторов к эстрогенам и прогестеронусвидетельствует о развитии низкодифференцированных опухолей, потенциально опасных для жизни женщины.

Общий принцип результата — чем больше экспрессия рецепторной активности, тем выше вероятность прогрессирования опухоли. Чем ниже активность, тем меньше возможность естественного оплодотворения.

Хронический эндометрит

Хроническим эндометритом называют воспаление мукозного слоя матки, которое провоцируют различные вирусы или патогенные микроорганизмы. В патологическом очаге происходят морфологические и функциональные изменения эндометрия.Хронический эндометрит – клинико-морфологический синдром, при котором в результате повреждения эндометрия инфекционным агентом возникают множественные вторичные морфофункциональные изменения, нарушающие циклическую биотрансформацию слизистой оболочки матки, что приводит к стойкому нарушению менструальной и генеративной функций.Частота встречаемости хронического эндометрита в популяции составляет 2,6- 51%. Причём среди этих женщин бесплодны 60,4%, а неудачные попытки ЭКО и переноса эмбрионов отмечены у 37%. В 2006 г. Международная Федерация Гинекологии и Акушерства уравняла понятия «неразвивающаяся беременность» и «хронический эндометрит».

Причины хронического эндометрита:

  • инфекции органов малого таза, влагалища и цервикального канала;
  • внутриматочная спираль;
  • ранние интимные контакты;
  • радиотерапия тазовых органов;
  • хирургическое вмешательство в полость матки;
  • злоупотреблением алкоголем и курение.

Практикующие специалисты относят воспалительные процессы, происходящие в органах малого таза, к аутоиммунной патологии. Для определения характера нарушений и выявления пациенток с патологическим ответом иммунной системы, который провоцирует воспаление эндометрия, назначается иммуногистохимическое исследование, которое проводят с использованием стандартной панели моноклональных антител:CD16, CD20, CD138, CD56, HLA-DR.

Иммуногистохимическое исследование рецептивности эндометрия (окно имплантации)

Рецептивность эндометрия – комплекс структурно -функциональных характеристик эндометрия, определяющий способность его к имплантации. С начала 90-х годов прошлого столетия понятие «рецептивность эндометрия» начинает обретать своё современное значение как процесс сложной интеграции и многоуровневого «диалога» между эндометрием и эмбрионом в специфический период «окна имплантации».Продолжительность «окна имплантации» у человека составляет в среднем 4 дня: с 6-го по 8-10 — й день после пика секреции ЛГ, или 20-24 день менструального цикла (при 28 -дневном менструальном цикле).В настоящее время различают три уровня рецептивности: генетический, протеомный и гистологический. При открытии «окна имплантации» в эндометрии усиливается экспрессия 395 генов (АроЕ, PLA2) и снижается экспрессия 186 генов (ITF, различные протеазы, внеклеточные матриксные белки и др.). Среди протеомных маркёров, связанных с рецептивностью эндометрия, выделяют различные молекулы адгезии, факторы роста, цитокины и рецепторы: семейство IL-1, LIF и LIF-R, αVβ3, TNF-α, IFN-γ и др. Из них наиболее изученным является лейкемия-ингибирующий фактор (LIF) – член семейства IL-6. Максимальная его экспрессия в эндометрии наблюдается на 20-й день цикла.Третий уровень рецептивности – гистологический. «Окну имплантации» в эндометрии соответствует средняя стадия фазы секреции менструального цикла.Эндометрий может обладать рецептивными свойствами только в том случае, если молекулярные маркёры рецептивности выявляются точно в среднюю стадию фазы секреции менструального цикла.Одним из ключевых ультраструктурных образований, участвующих в формировании рецептивности, являются пиноподии. Это микроскопические выпячивания в апикальной части поверхностного эпителия эндометрия, образующиеся на месте микроворсинок в «окно имплантации» и выступающие в полость матки. Предполагают, что основные рецепторы для прикрепления бластоциты располагаются на поверхности пиноподий, где также концентрированно экспрессируется LIF.Любой дисбаланс в экспрессии стероидных рецепторов может привести к нарушению морфофункциональных свойств эндометрия, его рецептивности. Поэтому определение уровня ER и PR в среднюю стадию фазы секреции позволяет дополнить морфологическое исследование эндометрия, оценить его рецептивность. В норме показатель соотношения PR/ER в строме колеблется от 2 до 4.В среднюю стадию фазы секреции наблюдается физиологическое снижение уровня ERα в эндометрии. Это – критическое событие, освобождающее от подавляющего влияния определённые гены и обеспечивающее сигнал для начала внутриматочной рецептивности.

Гиперэкспрессия ER α в среднюю стадию фазы секреции вызывает нарушение экспрессии биологических маркёров имплантации, нарушает рецептивность эндометрия.

Программа комплесного исследования состоит из следующей панели антител: ER, PgR, CD56, CD138, LIF, а также подсчет количества пиноподий.

Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование молочной железы дает возможность изучать образцы тканей, которые медики взяли во время биопсии. Информативная и новая методика, позволяющая определить формирование злокачественной опухоли, если у врачей есть подозрения. Многие женщины после 45 лет сталкиваются с раком молочных желез. Благодаря исследованиям медики могут определить тип и характер заболевания.

Что такое иммуногистохимия?

Иммуногистохимия

Раковые клетки производят определенные белки, у которых есть связь с антителами. ИГХ позволяет изучить взаимодействие между ними. Во время исследования используются стандартные антитела. Учитывая определенные изменения при взаимодействии клеток, медики определяют структуру и форму злокачественного новообразования.

Опухоль для человеческого организма является чужеродной. Во время борьбы с ней в теле пациента вырабатываются антитела. Иммуногистохимия помогает обнаружить раковые клетки, определяет их структуру и строение.

Для врачей подобное исследование важно тем, что по результатам они подбирают максимально эффективное лечение пациентам. При помощи ИГХ можно определить:

  • развитие опухолей;
  • рецепторы стероидных гормонов;
  • образование злокачественной опухоли, если первичные признаки очага отсутствуют;
  • формирование новообразования без классификации;
  • количество мембранного белка (HER2) в клетках молочной железы.

Результатами исследования занимается специалист онколог. Важно определить количество гормональных рецепторов в молочных железах. Чем больше показатели, тем опухоль спокойнее и медленнее растет. У пациента высокие шансы, чтобы полностью избавиться от рака на ранней стадии развития.

Гормональная терапия в таких ситуациях позволяет добиться положительного исхода на 80%.

Проведение исследования

Лабораторная диагностика тканей молочной железы

Иммуногистохимия (ИГХ) при раке молочной железы осуществляется методом забора небольшого количества тканей новообразования. Биопсия проводится в месте, где врачи предполагают формирование злокачественных клеток. Перед процедурой врач отмечает маркером место ее проведения на груди женщины.

На исследование берутся также отсеченные ткани опухоли, которые были получены после хирургического вмешательства. Дальше диагностика проводится следующим образом:

  1. Полученный материал отправляют в лабораторию.
  2. Ткани помещают в специальную емкость, где находится формалин.
  3. Их обезжиривают.
  4. Добавляют жидкий парафин, чтобы получить блоки и информацию о строении, структуре клеток, тканей.
  5. Срезают слой, толщина которого составляет 1 мм.
  6. Укладывают на специально подготовленное стекло.
  7. Для окрашивания среза используются препараты и антитела ИГХ.
  8. Результаты исследования специалисты получают через 12 дней.

Для определения рака молочной железы применяются различные маркеры. Если результаты исследования показывают присутствие в тканях большого количества гормонов (прогестерона и эстрогена), опухоль прогрессирует. В большинстве случаев присутствуют уже метастазы. Средняя концентрация гормонов указывает на то, что злокачественное новообразование слабо развивается. У пациента есть шансы пройти эффективное лечение медицинскими препаратами и добиться положительного результата.

Исход будет благоприятный после применения гормональных средств, если маркер Ki-67 при онкологии груди находится в пределах 15-17%. О стремительном развитии опухоли говорит показатель, достигающий 35%. Врачи в такой ситуации назначают больным только химиотерапевтические препараты, которые смогут приостановить ее прогрессирование. Если показатели превышают 85%, больному невозможно помочь и избежать летального исхода.

О чем говорят результаты?

Результаты диагностики тканей

Иммуногистохимический метод анализа позволяет определить многочисленные факторы, связанные со злокачественным новообразованием. Речь идет:

  • о видах и подвидах раковой опухоли;
  • об источниках метастазирования;
  • о площади поражения, на которую распространились раковые клетки по всему организму больного;
  • об эффективности проводимого лечения пациентам с онкологией.

Исследования позволяют получить информацию, что касается стадии развития заболевания. Как быстро растет опухоль. Современные специалисты считают, что иммуногистохимический анализ является максимально информативным, если сравнивать его с другими привычными исследованиями при формировании рака молочных желез. Иногда врачам необходима именно гистология. В большинстве случаев проводятся оба анализа. Так специалисты получают больше информации о карциноме.

В медицине существуют информационные факторы. Они позволяют изучить поведение и реакцию опухоли на лечение.

Показывают возможное поведение злокачественного новообразования в момент проведения диагностики. Терапия не влияет на показатели. Специалист получает информацию о том, как быстро прогрессирует рак молочной железы. По результатам он может определить оптимальный метод лечения для каждого пациента индивидуально.

Изучение позволяет получить информацию о том, как раковые клетки отреагируют на выбранную методику терапии.

Прогностические и предсказывающие факторы могут быть систематизированы по отдельности. Но результаты исследования покажут схожие данные. При положительном раке молочной железы количество белка HER2 повышенное. Данные указывают на агрессивное протекание злокачественных процессов. В отдаленных органах присутствуют ранние метастазы.

Негативный результат свидетельствует о небольшом количестве мембранного белка в опухоли. Она не будет реагировать на применение медицинских препаратов во время лечения.

Расшифровка исследования

Иммуногистохимия позволяет изучить структуру взятого материала во время биопсии или после оперативного вмешательства. Присутствие определенных антител даст возможность специалистам установить вид злокачественного новообразования.

Интерпретацией и расшифровкой иммуногистохимического исследования занимается квалифицированный специалист – онколог. Врач должен подробно рассказать пациенту, на что указывает полученная информация. В результатах прописывается показатель Ki-67. Он показывает насколько агрессивная опухоль.

Во время исследований врачи изучают гормональный фон пациентки, который тесно связан с поведением злокачественного новообразования. Медики определяют площадь поражения патологическими процессами, скорость формирования метастаз.

Иммуногистохимический анализ – это такой метод диагностики, позволяющий определить стадию рака молочной железы, форму заболевания, а также степень распространения его. На основании полученных данных специалист назначает максимально подходящее лечение.

При стабильном гормональном фоне и неактивной опухоли женщине рекомендуют ограничиться приемом гормональных лекарств. Если рак молочной железы ведет себя агрессивно и активно развивается, показатель Ki-67 повышается. В данной ситуации врачи назначают больным более тяжелые химические препараты.

В здоровом организме клетки самостоятельно восстанавливаются и нормально делятся. Положительный анализ на присутствие мембранного белка (HER2) указывает, что рак прогрессирует. Злокачественная опухоль будет увеличиваться в объеме. Чтобы подавить ее распространение и рост специалисты назначают больным медикаментозную терапию.

Отрицательные результаты РМЖ с негативным показателем HER2 требуют применения более сильных химиотерапевтических препаратов. Лечение подбирает врач онколог, учитывая индивидуальные особенности пациента и протекание патологических процессов.

Иммуногистохимия представляет собой серьезный и сложный метод диагностики рака молочной железы. Медики во время исследований применяют многочисленные маркеры. Правильно расшифровать результаты может только квалифицированный доктор. В большинстве случаев при подтверждении развития рака у женщины, собирают целый врачебный консилиум. Мнение разных специалистов позволяет правильно и адекватно подобрать, также расписать тактику лечения злокачественной опухоли.

ИГХ – что это за исследование?

Применяемое в онкологии иммуногистохимическое исследование позволяет обнаружить взаимосвязь между белками, синтезируемыми злокачественными клетками, и антигенами. Выявив эту связь, специалисты устанавливают вид и структуру новообразования.

ИГХ при онкологических патологиях грудных желез осуществляют, чтобы:

  • установить вид заболевания, восприимчивый к определенной терапии;
  • выявить метастазы, пущенные опухолью, и степень их распространения;
  • найти источник метастазов;
  • установить стадию развития выявленной опухоли;
  • оценить действенность терапии;
  • узнать скорость распространения метастазов;
  • выявить чувствительность кровяных клеток к конкретным лекарственным веществам для отсеивания неэффективных медикаментов.

Диагностическое исследование применяется для определения состояния любой части человеческого организма. Назначают процедуру не только при раке грудных желез, но и при любых новообразованиях, предположительно являющихся злокачественными. Посредством ИГХ определяют состояние эндометрия при:

  • появлении метастазов;
  • патологиях матки;
  • бесплодии;
  • неудачных процедурах ЭКО;
  • болезнях органов тазовой области, имеющих разную этиологию;
  • постоянном самопроизвольном прерывании беременности.

Противопоказаний к проведению процедуры нет. Отказываются от исследования, только если по каким-либо причинам у пациента невозможно взять биоматериал.

Перед процедурой пациентка:

  • не должна принимать гормональные лекарства (за неделю до взятия биоматериала);
  • не должна принимать медикаменты для остановки крови;
  • должна провести тщательные гигиенические процедуры.

Исследование проводят в конкретные дни менструального цикла:

  • на 5 – 7 день изучают патологические изменения эндометрия;
  • на 20 – 24 день оценивают секреторную и рецепторную деятельность.

Ход исследования

Для проведения иммуногистохимического теста методом биопсии забирают некоторое количество опухолевой ткани грудной железы. Забор осуществляется на участке, где специалист подозревает скопление злокачественных клеток.

Перед процедурой медик отмечает выбранную точку на груди пациентки. Также на анализ могут взять куски опухоли, вырезанные при хирургическом вмешательстве.

Далее диагностическое мероприятие проводится следующим путем:

  1. Собранный биоматериал относят в лабораторию.
  2. Опухолевые образцы опускают в емкость с формалином.
  3. Биоматериал обезжиривают.
  4. Вливают парафиновую жидкость, позволяющую определить структуру и вид опухолевых тканей.
  5. Отрезают кусок опухоли толщиной 1 мм.
  6. Кладут на лабораторное стекло.
  7. В качестве красителей используют химические реагенты и антитела.
  8. Итоги теста готовы спустя две недели.

Для обнаружения рака молочных желез берут разные маркеры. Если по итогам теста выявлено наличие в опухолевых тканях значительного количества женских половых гормонов, то опухоль активно развивается. Возможно даже, что уже пошли метастазы. Если скопление гормонов среднее, то злокачественные клетки размножаются неактивно. А значит, при грамотном и своевременном лечении у пациентки есть возможность восстановить здоровье.

Положительный итог гормонального лечения возможен, если маркер Ki-67 при злокачественной опухоли молочной железы не превышает 15 – 17%. Новообразование стремительно растет, если маркер достигает 35%. В этой ситуации незамедлительно осуществляется химиотерапия, позволяющая затормозить размножение злокачественных клеток. Если же маркер выше 85%, то проводить лечение уже поздно, смертельный исход неизбежен.

Расшифровывая результаты, смотрят на прогестероновые (PR) и эстрогеновые (ER) рецепторы. При ИГХ также определяют количество рецептора человеческого эпидермального фактора роста (белок HER-2) во взятом у пациентки биоматериале. При злокачественной опухоли молочной железы HER-2 повышен.

При повышенном ER и PR в опухолевых тканях можно говорить, что злокачественное образование растет под воздействием гормонов. Если концентрация ER и PR не выходит за пределы нормы или выходит незначительно, то пациентка может надеяться на успешное лечение.

Расшифровывают показатели ИГХ по специальной цветовой шкале, соотнося цвета на шкале с оттенками биоматериала.

  1. 0 и +1. Концентрация белка соответствует норме. Терапевтические мероприятия не нужны.
  2. +2. Концентрация белка средняя. В грудной железе присутствует злокачественная опухоль. Обычно проводят дополнительное исследование, чтобы подтвердить верный результат первого теста. Дополнительное исследование называется FISH, позволяет узнать содержание белка в каждой клетке. Если HER-2 в норме, то FISH-тест даст положительный результат, если повышен, то отрицательный.
  3. +3. Концентрация белка намного выше нормального значения. Однозначно в грудной железе присутствует злокачественное новообразование.

Если тест показал высокую концентрацию белка, то опухоль агрессивного типа, растет интенсивно.

По результатам ИГХ выделяют 4 вида рака груди:

  • А-люминальный – рецепторы ER положительны, рецепторы к белку отрицательны, Ki-67 ниже 14%;
  • Б-люминальный – рецепторы ER и HER-2 отрицательны, Ki-67 выше 15%;
  • сверхэкспрессирующий – рецепторы ER и PR отрицательны, рецепторы к белку положительны;
  • базальноподобный – все рецепторы отрицательны.

Прогностические маркеры

По ним определяют наиболее вероятное поведение новообразования на момент проведения теста. Нет влияния терапии на исследование. Тест позволяет определить агрессивность опухоли. Прогноз важен для подбора наиболее подходящих медикаментов и лечебных процедур.

Как делается анализ?

Иммуногистохимия рака молочной железы проводится путем забора ткани, пораженной онкологией. Биоматериал добывается с помощью биопсии или в процессе оперативного вмешательства. После этого выполняется анализ по следующим этапам:

  • биоматериал помещается в формалин, после чего переправляется в лабораторию для проведения дальнейших манипуляций;
  • специалисты обезжиривают ткань;
  • в материал добавляется специальный жидкий парафин, который помогает выявить структуру клеток опухоли;
  • выполняется микротравмирование – процедура срезания тонкого слоя парафина, толщиной в 1 мм;
  • взятые образцы размещаются на специальных стеклах;
  • выполняется окрашивание материала с помощью реактивов;
  • образцы оставляют на 12 дней, после чего оценивают результат.

Для проведения анализа используют несколько видов маркеров. Если в ходе исследования в биоматериале обнаружена повышенная концентрация эстрогенов и прогестеронов, делают заключение о развитии опухоли. Это также говорит о появлении метастазов от новообразования. Если анализ показал средние результаты, то говорят о слабом росте опухоли. Это говорит о том, что больной после соответствующей терапии имеет все шансы на выздоровление.

Чисто рецепторов HER2 влияют на цветовую гамму реакторов с клетками, которые поражены раком. Чем их больше, тем ярче тон. В этом случае гистология проявляется себя, как неточная наука, поскольку восприятие оттенков образцов субъективное и зависит только от ощущений специалиста, выполняющего анализ.

Возможности

Современный вид диагностики позволяет определить:

  • распространение опухолевого процесса;
  • скорость роста злокачественных новообразований;
  • вид опухоли;
  • источник метастазов;
  • уровень злокачественности.

Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования может оцениваться степень эффективности лечения раковых заболеваний.

В каких целях проводится иммуногистохимия

Если пациенту назначается иммуногистохимия, то этим врач преследует несколько целей:

  • Иммуногистохимия позволяет выявить гистологическую и нозологическую принадлежность опухоли. С помощью этого исследования определяется класс новообразования.
  • С помощью иммуногистохимии определяется локализация первичного очага новообразования. В частности, если месторасположение не установлено, то выявить его можно и по отдельному метастазу.
  • Иммуногистохимия позволяет определиться с тактикой лечения. В частности, этот метод исследования позволяет выявить чувствительность опухолевых клеток к воздействию препаратов таргетной терапии или химиотерапии. С помощью иммуногистохимии врачи определяют резистентность опухоли к некоторым группам химиотерапевтических препаратов. Например, опухоли молочной железы, которые имеют рецепторы к эстрогену лечат немного иначе (в протокол лечения добавляется гормональная терапия). Исследования на протоонкоген her-2-neu позволяют выяснить чувствительность раковой опухоли молочной железы на некоторые противоопухолевые препараты. Если говорить о тесте на маркер пролиферации, то с его помощью определяется степень агрессивности опухоли.

Пример гистологии рака груди

Диагноз: c-r правосторонный . T2N0M0

Иследовано 15 фрагментов ткани молочной железы:

  • 10 из них дукталная карцинома insitu, солидного и криброформного типа, G2 , максимальной протяжёностью 9 мм: выявляются фокусы инвазивного неспецифицированного рака: строма с выраженным склерозом, местами с диффузной лимфоидной инфилтрацией по переферии инвазивного компонента, формированием лимфоидных фолликулов.

  • 5 фрагментов – ткань молочной железы с аденозом. По данному материалу стадирование онкопроцесса не представляется возможным.

Применение в гинекологии

Нередко врачи назначают пациенткам ИГХ-исследование при дисплазии шейки матки. Эта патология сопровождается перерождением здоровых клеток в атипические. Такое состояние врачи оценивают как предраковое. Дисплазия 3 степени практически всегда приводит к образованию злокачественной опухоли на шейке матки.

ИГХ помогает оценить риск развития онкологических заболеваний у пациенток с дисплазией. Для исследования используют антитела к белкам p16INK4a и Ki-67.

При анализе определяют не только концентрацию антигенов, но и соотношение между уровнями вышеуказанных белков. Референсные значения показателей исследования индивидуальны и зависят от предполагаемого диагноза. Точно расшифровать результаты теста может только лечащий врач. Высокие показатели концентрации антигенов и соотношения между p16INK4a и Ki-67 указывают на большой риск развития рака шейки матки.

Методика проведения анализа

Иммуногистохимическое исследование проводится в несколько этапов, первым из них является сбор биологического материала. Его получают путем биопсии или изъятия материала во время проведения операции.

Кусочек ткани помещают в формалин и направляют в лабораторию, где его подвергают изменениям:

  1. Материал обезжиривают специальными составами и заливают парафином. В таком состоянии он может храниться практически вечно, поэтому при необходимости исследование можно повторять.
  2. На следующем этапе получают тончайшие срезы — проводят микротомирование. Их размещают на специальных стеклах.
  3. Приготовленные срезы обрабатывают растворами антител определенной концентрации. Использовать для обработки могут составы, содержащие разное количество антител. Какие из них вступят во взаимодействие с раковыми клетками, будет зависеть от разновидности опухоли.

Результаты исследования будут готовы только через одну или две недели.

Что означают результаты?

Иммуногистохимия молочной железы — это сложный многоступенчатый анализ, на результат которого влияет множество факторов, например, низкое качество реагентов, недостаточная фиксация исследуемого биологического объекта или неправильно подобранная панель антител. Количество искомых клеток-мишеней исчисляется сотнями, поэтому специалист должен понимать, что он ищет и использовать для этого необходимые антитела.

Гистологи оценивают интенсивность окрашивания опухолевых клеток после взаимодействия с реактивами по специальной шкале:

  • 0-1+ — онкологии нет;
  • 2+ — онкологическое образование отрицательное;
  • 3+ — онкологическое образование положительное.

Длительность ИГХ при раке молочной железы во многом зависит от способа его проведения. Бывает ручной и автоматический. Последний считается более совершенным, поскольку вероятность технической ошибки сведена к минимуму, да и проводится он гораздо быстрее.

Перед определением тактики лечения онколог задается различными вопросами: какова вероятность рецидива заболевания у больного или его смерти, какой результат лечения можно ожидать. Для этого специалист изучает особенности и характеристики опухоли и в зависимости от различных предсказывающих и прогностических факторов назначает тактику лечения.

К этим факторам относятся основополагающие признаки, которые определяют особенность протекания болезни и ее исход. При операбельных формах онкологии груди к таким факторам относятся: морфологическое строение новообразования и его размер, состояние лимфоузлов. Т. е. подобные характеристики определяют хронологию болезни.

Особенности прогностических факторов:

  1. Базируются на биологических характеристиках опухолевого образования.
  2. Взаимосвязаны с продолжительностью жизни пациента в независимости от тактики терапии.
  3. Делят пациентов по степени риска смерти, рецидива.
  4. Примеры: индекс митотической активности, протеолитические ферменты, антиогенез и др.

Индекс митотической активности (MAI) является независимым прогностическим фактором, который характеризует продолжительность жизни больных. У пациентов с индексом меньше 10 в процессе наблюдения летальный исход составлял 6 %, у пациентов с индексом больше 10 — 28 %.

Протеолитические ферменты имеют значение в процессе метастазирования. В трансформированных злокачественных клетках таких ферментов вырабатывается больше, чем в здоровых, поэтому при злокачественных образованиях наблюдается выход этих веществ в межклеточное пространство и увеличение активности. Т. е. ферменты вовлечены в процесс онкогенеза. Т. о. пациенты с низким уровнем этих ферментов имеют более благоприятный прогноз по безрецидивной выживаемости.

Способность новообразования расти и метастазировать во многом зависит от ангиогенеза — образования новых кровеносных сосудов. В процессе наблюдения пациентов в течение 10 лет, было выявлено, что у женщин с высоким значением плотности микрососудов в опухоли прогноз хуже.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Такой анализ просто незаменим, если есть подозрение на наличие раковых клеток в груди. Обязательно определение количества рецепторов эстрогена и прогестерона. При их повышении активизируется процесс роста злокачественных клеток.

ИГХ-исследование позволяет не только распознать онкологическое заболевание, но и определить его стадию. При помощи исследования врачи выясняют, показана ли гормональная терапия.

Опухоли, имеющие большую концентрацию гормонов, чаще всего вполне эффективно лечатся антигормональными препаратами.

Во время проведения анализа обязательно определяют показатель Ki-67, он помогает определить злокачественность процесса. Если иммуногистохимическое исследование молочной железы показывает Ki-67 до 15 %, то исход заболевания считается благоприятным. Если показатель доходит до 30 %, то без химиотерапии не обойтись, потому что опухоль растет довольно быстро. Отметка в 90 % чаще всего свидетельствует о неизбежности летального исхода.

Данный анализ назначается не только при подозрении на онкологию груди, но еще он оказывается довольно информативным, если:

  • Имеется бесплодие.
  • Обнаружены злокачественные образования матки.
  • Наблюдаются патологические изменения в репродуктивной системе.

Показатели

В расшифровке ИГХ-исследования указывают концентрацию антигенов злокачественных новообразований. В норме такие белки должны полностью отсутствовать. Их наличие в биоматериале указывает на развитие опухоли. Чем выше концентрация антигенов, тем активнее происходит разрастание новообразования.

Кроме этого, в результатах анализа указывают разновидность атипичных клеток и их количество. Точно интерпретировать данные теста может только врач-онколог.

Что показывает анализ

Нередко пациентам назначаю одновременно гистограмму и ИГХ-исследование. Что это такое, и чем отличаются эти два вида анализов? При гистограмме биоматериал исследуют под микроскопом и определяют наличие раковых клеток. При иммуногистохимическом исследовании злокачественные новообразования выявляют с помощью реакции “антиген – антитело”. Такой способ исследования считается более информативным.

ИГХ показывает не только наличие атипичных клеток. С помощью этого исследования можно выявить:

  • разновидность новообразования;
  • распространение онкологического процесса;
  • расположение первичной метастазирующей опухоли;
  • стадию рака;
  • темпы роста опухоли.

Кроме этого, с помощью иммуногистохимии можно определить чувствительность раковых клеток к химиопрепаратам и облучению. Это позволяет выбрать наиболее эффективный метод лечения.

Такие факторы демонстрируют возможное поведение опухоли на момент анализа. Лечение не оказывает влияние на исследование. Врач благодаря ИГХ видит, как ведет себя опухоль. Прогнозом специалист пользуется для определения подходящей терапии для каждого пациента.

Способы проведения исследования

Реакцию можно получить несколькими способами. Часто применяется прямой, при котором используется один вид маркированных антител. Последние должны связаться с выявляемым веществом или молекулой-мишенью. Если последняя присутствует в биоптате, то исследуемая ткань окрашивается.

Непрямой метод считается более информативным и чувствительным. Его суть заключается в поэтапном введении 2 разных антител. Немаркированные первичные антитела вступают в реакцию с опухолевым антигеном в биоптате, образуют комплекс антитело-антиген. Затем вводят вторичные уже маркированные антитела (реагент), которые связываются с определенной частью молекулы первичного антитела. Т. е. первичные антитела являются антигенами для вторичных.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия

Такой анализ проводится, если:

  • Часто наблюдаются выкидыши.
  • У женщины было несколько неудачных попыток ЭКО.
  • Диагностирована хроническая форма эндометрита.

Данное исследование помогает выяснить, имеются ли клетки, мешающие зачатию естественным путем.

ИГХ-исследование тканей эндометрия назначается женщинам, у которых уже было несколько неудачных попыток искусственного оплодотворения.

Взятие тканей эндометрия проводится в разные дни цикла, которые назначает врач.

Что же такое – биопсия

Биопсия (от латинского “био” – жизнь и “опсия” – смотрю) – это взятие (из живого организма) тканей для дальнейшего их микроскопического исследования после окраски специальными красителями. Биопсия при большинстве онкологических заболеваний – обязательный метод исследования для постановки диагноза.

Биопсийный материал берется разными способами – с помощью специальной иглы, отщипыванием кусочка ткани, исследуются промывочные воды и т.п.

Само взятие биопсийного материала, как правило, безболезненно. Неприятен, зачастую, процесс взятия – это сопряжено с трудностями доступа к некоторым новообразованиям.

В ряде случаев, в процессе биопсии применим наркоз, во многих случаях биопсия делается

под инструментальным (например – УЗИ) контролем.

Бывает, что сразу требуется и удаление имеющегося новообразования и биопсия сразу – и исследование и лечение (скажем, при удалении полипа с целью исследования таким

образом происходит и излечение).

Выявление рака груди

Этот анализ назначают при подозрении на рак молочной железы. ИГХ-исследование в этом случае помогает выявить не только наличие злокачественных клеток, но и чувствительность рецепторов новообразования к гормонам. Ведь нередко рост опухоли молочных желез зависит от уровня эстрогенов и прогестерона. С помощью этого исследования можно также оценить необходимость назначения гормональных лекарств.

Для диагностики рака молочной железы используется специальный набор маркеров. В расшифровке анализа необходимо обратить внимание на концентрацию антигена Ki-67. По этому показателю можно судить о прогнозе заболевания, ведь он указывает на скорость роста опухоли.

Концентрация антигена определяется в процентах. В зависимости от уровня Ki-67 подбирается метод лечения:

  1. Менее 15 %. Прогноз заболевания считается благоприятным. Возможно излечение с помощью гормональной терапии.
  2. От 16 до 30 %. Умеренный рост новообразования. Распространение опухоли можно приостановить с помощью гормонов.
  3. Более 30 %. Такая концентрация антигена свидетельствует о быстром росте раковой опухоли. Необходимо назначение химиотерапии.

Если показатель антигена составляет менее 10%, то в подавляющем большинстве случаев рост опухоли удается остановить с помощью гормонов. Крайне опасной считается концентрация Ki-67 более 90 %. Это указывает на запущенную стадию рака. В таких случаях заболевание чаще всего приводит к летальному исходу.

Зачем проводят ИГХ?

ИГХ при раке молочной железы проводят с целью:

  • определения вида заболевания для назначения терапии;
  • раскрытия наличие метастаз, идущих от опухоли, и их границы;
  • обнаружения источника метастаз;
  • диагностирования стадии патологии при ее выявлении;
  • оценки эффективности терапии;
  • установления скорости развития метастаз при наличии таковых;
  • выявления чувствительности клеток крови к тем или иным препаратам и методам лечения, чтобы оставить эффективные средства и исключить те медикаменты и способы терапии, которые не влияют на опухоль.

Когда назначается исследование?

ИГХ назначается в том случае, когда обычного гистологического исследования недостаточно. Например, когда опухоль молочной железы имеет неспецифичное микроскопическое строение, не позволяющее поставить точный окончательный диагноз.

Морфологическая диагностика, как фактор повышения эффективности лечения рака

Эффективность лечения рака зависит не только от развития методов терапии — без постановки точного морфологического диагноза врач-онколог не может выбрать подходящий для конкретной опухоли вид лечения. Важным компонентом современной онкологической помощи, который, к сожалению, часто остается в тени достижений технологий разрушения опухолей, является правильная постановка диагноза. А точнее — определение типа опухолевых клеток и, соответственно, их устойчивости к различным видам внешнего воздействия. Решает эту задачу морфологическая диагностика, базовый принцип которой — исследование образцов опухолевых клеток.

С каким образцами опухолевых клеток работает патоморфология?

Базой для морфологической диагностики являются образцы тканей (фрагменты опухолей). Наиболее частым способом забора материала является трепан-биопсия, которая осуществляется при помощи специальной толстой иглы, также используется инцизионная биопсия, которая выполняется при помощи скальпеля и эксцизионная биопсия с тотальным забором пораженного участка (например, биопсия лимфоузла при диагностике лимфом).

После образцы тканей проходят этапы специальной подготовки (фиксации и проводки), после чего пропитываются парафином с формированием блока. Из блоков на специальных устройствах (микротомах) приготавливаются тонкие срезы толщиной 4-5 микрон. Полученные срезы помещаются на стекла, подвергающиеся различным методам окраски с целью выделения различий в клеточных структурах. Эти, так называемые, “стекла”, подлежат тщательному рассмотрению врачом-патоморфологом.

Каждый из этапов подготовки образцов критичен для возможности и точности последующих молекулярных методов исследования, поэтому нарушение технологии подготовки может привезти к неправильному назначению лечения.

Зачем изучать опухоли под микроскопом?

Количество известных разновидностей опухолей — велико. Наиболее полной считается классификация Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), которая в печатном виде представляет собой 11 томов, около 400 страниц в каждом. Итог — ошибки в постановке диагноза неизбежны.

Патоморфологическая классификация опухолей Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) едва уместилась в 11 томов

Показатель ошибок при постановке диагноза поражает: от 5 до 50% всех онкологических диагнозов в мире — неверны. Половина этих ошибок не становятся фатальными — различные виды рака могут одинаково реагировать на определенный подход к лечению. Но значительная часть неточностей приводит к неадекватному лечению рака у пациентов, которое может способствовать прогрессированию заболевания.

Среди объективных причин ошибочных диагнозов, связанных с морфологической диагностикой, лидирует невозможность получения образца опухолевой ткани для ее морфологического исследования ввиду трудности доступа либо тяжелого состояния пациента.

Среди субъективных причин ошибок морфологической диагностики наиболее распространены:

  1. ошибка при заборе материала (например, при раке простаты следует проводить множественный забор образцов, т.к. опухоль в этом органе может иметь крайне сложную пространственную форму);
  2. отсутствие возможности конкретного лечебного учреждения провести морфологическую диагностику в необходимом объеме (собственная морфологическая лаборатория — это сложный и дорогой институт);
  3. нарушения протоколов как в части отказа от забора и морфологического исследования образцов, так и в части стандартов проведения морфологической диагностики опухоли (в том числе и устаревшие методики, отсутствие необходимого оборудования, низкая квалификация специалистов, на повышение которой не выделяется средств).

И только морфологическая диагностика, проведенная с соблюдением всех стандартов взятия материала, подготовки и рассмотрения образцов, способна дать окончательный ответ о типе опухоли и ее особенностях.

Гистология и иммуногистохимия — в чем отличие?

Первоначально, морфологическая диагностика решала задачу определения наличия злокачественного процесса в ткани. Для этого применялся метод, который в современной медицине называется “гистологическое морфологическое исследование”, или, как часто можно услышать от пациентов “гистология”.

С помощью гистологического морфологического исследования может быть проведена дифференциальная диагностика доброкачественных процессов и злокачественной опухоли — т.е. определение наличия измененных (атипичных) клеток в образце тканей. Простое гистологическое исследование в любом случае носит субъективный характер и зависит от профессионализма проводящего его врача. Поэтому, при подозрении на наличие опухоли, второе мнение от ведущих экспертов МИБС в этой области значительно снижает риск ошибочного диагноза.

При подтверждении опухолевого процесса в тканях, пациенту требуется более точная диагностика, которая точно определит тип опухоли и укажет на наиболее эффективный подход к ее лечению — иммуногистохимия.

Зачем нужно иммуногистохимическое исследование?

Основой иммуногистохимии является окрашивание клеток специфическими веществами, которые реагируют на определенные типы опухолевых клеток и “мишени”, специфические свойства и мутации генов конкретного типа рака.

Пример иммуногистохимии в МИБС: Позитивная реакция на СК14 (коричневое окрашивание) вокруг всех подозрительных структур исключает рак молочной железы – дополнительное лечение пациентке не требуется

Таким образом, иммуногистохимия позволяет точно указать нозологию (разновидность) опухоли, что чрезвычайно важно для проведения адекватного лечения, а также – для прогнозирования развития заболевания. Например, некоторые разновидности рака молочной железы (тубулярный, фиброматоз-подобный) не требуют иного лечения, кроме хирургического.

Иммуногистохимия в МИБС: Позитивная реакция на bcl10 в лимфоидных клетках конъюнктивы глаза (коричневое окрашивание вокруг фолликула) подтверждает диагноз MALT-лимфомы, при которой наибольшего эффекта покажет химиотерапия, а не хирургическое лечение

Лечим метастазы. Когда не обойтись без патоморфолога?

Метастазы представляют собой “копию” злокачественных клеток первичной опухоли, точнее, того типа тканей, из которых развилось новообразование. Поэтому тип клеток метастаза может указать на локализацию первичного рака. Это крайне важно, если первичная опухоль не проявляет себя симптомами и не диагностирована. С другой стороны, если первичная опухоль, имеет уязвимость к препаратам таргетной терапии, то ее метастазы могут утратить это свойство. В таком случае иммуногистохимия образца метастазов покажет, что для первичной опухоли лечение будет прежним, а вот для метастазов следует избрать другой подход.

Молекулярные исследования + Таргетная терапия + Иммунотерапия = Эффективное лечение рака

Благодаря развитию методов молекулярной диагностики (иммуногистохимия, ПЦР, секвенирование), лекарственная терапия рака идет большими шагами вперед. Помимо химиотерапии, сейчас активно используются таргетные препараты, целенаправленно воздействующие на мишени в опухолевых клетках (HER2, CD20, c-kit, мутантный b-Raf и др.).

Кроме того, в настоящее время онкология переживает «бум» иммунотерапии, при применении которой лекарственные препараты разрывают порочный механизм, препятствующий уничтожению опухолей собственными иммунными клетками.

Однако для правильного назначения таких препаратов необходимым условием является определение специфических маркеров при помощи иммуногистохимического или молекулярно-генетического исследования опухолевой ткани. Более того, часто маркеры, указывающие на чувствительность к иммунотерапии (MMR, MSI), также говорят о том, что пациенту не следует назначать химиотерапию, в особенности это касается рака толстой кишки и желудка.

Иммуногистохимия показала, что негативная реакция на MSH2 (синее окрашивание ядер опухоли, коричневое окрашивание неопухолевой ткани) свидетельствует о том, что рак тела матки, представленный на данном слайде, чувствителен к иммунотерапии

Какой рак можно вылечить без операции?

Некоторые разновидности опухоли не только не требуют хирургического лечения, но оно им противопоказано, так как может привести к прогрессированию заболевания. Это прежде всего лимфома, опухоль, возникающая из лимфоцитов, которые располагаются как в лимфоузлах, так и в паренхиматозных органах.

Развитие иммуногистохимии и основанных на ее результатах таргетной терапии и иммунотерапии постоянно расширяют спектр видов рака, которые можно вылечить “точечным” воздействием исключительно на опухолевые клетки. Помимо лечения лимфомы, по состоянию на начало 2019 года наибольшее применение методы иммунотерапии и таргетного лечения получили при лечении таких заболеваний, как:

  1. рак молочной железы;
  2. рак простаты;
  3. рак кишечника;
  4. рак легкого;
  5. лимфомы;
  6. рак желудка;
  7. меланома

при которых современные протоколы лечения требуют выполнение иммуногистохимии. Большинство ошибок в диагностике и лечении данных заболеваний связано либо с не проведением иммуногистохимии, либо с ее неправильной интерпретацией. Цена ошибки, к сожалению, может быть фатальной, так как назначение неправильного лечения может привести к резистентности (устойчивости) опухолевых клеток к лекарственным препаратам, которые при правильном назначении часто приводят к выздоровлению пациента.

Как повысить качество морфологической диагностики в клиниках России?

Выбирайте МИБС как для первого проведения базовой морфологической диагностики либо иммуногистохимического исследования, так и для получения второго мнения от ведущих специалистов нашей медицинской компании относительно имеющихся образцов ткани опухоли (часто называемого пациентами “пересмотр стёкол”), полученных при обследовании в другом онкоцентре.

Почему следует выбрать патоморфологическую лабораторию МИБС?

  1. исследование и оценка рассматриваемого материала проводится одновременно несколькими ведущими специалистами в центральной патоморфологической лаборатории МИБС в Санкт-Петербурге, сотрудничающей с федеральными онкологическими центрами.
  2. все вопросы логистики центр МИБС в вашем регионе берет на себя.
  3. МИБС владеет всеми технологиями, необходимыми для постановки правильного патоморфологического диагноза. От вас не потребуется проводить дополнительные исследования в других лабораториях.
  4. Иммуногистохимическое исследование может быть проведено в полном объеме за счет средств ОМС (бесплатно для пациента) при наличии направления по форме 14у.

Как заказать морфологическое / иммуногистохимическое исследование в МИБС?

  1. позвоните в любой центр МИБС в вашем регионе;
  2. привезите материал (гистологические препараты, парафиновые блоки, копию выписки из истории болезни и прочие документы, описывающие характер заболевания) в центр МИБС вашего города;
  3. получите заключение через 3-10 дней (в зависимости от вида и объема исследования).

Раскин Григорий Александрович

руководитель патоморфологической службы

врач патологоанатом

доктор медицинских наук

admin

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Наверх